产品货号:
ALH048
中文名称:
病毒核酸提取试剂盒
英文名称:
Nucleic acid rapid extraction from virus
产品规格:
50T
发货周期:
1~3天
产品价格:
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本试剂盒适合于从无细胞体液,包括血浆、血清、腹水、培养细胞上清液、脑脊髓液及尿液等中快速提取高纯的病毒DNA/RNA。
本试剂盒采用特异性结合病毒DNA/RNA的离心吸附柱和独特的缓冲液系统。病毒裂解后,DNA/RNA后在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜(特别配备了Poly Carrier可以从体系中轻松捕获微量核酸),再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤,将盐、细胞代谢物、蛋白等杂质去除,最后低盐的洗脱缓冲液将纯净的病毒DNA/RNA从硅基质膜上洗脱。
- 不需要使用有毒的苯酚等试剂,也不需要乙醇沉淀等步骤。
- 节省时间,简捷,单个样品操作一般可在20分钟内完成。
- 多次柱漂洗确保高纯度,提取的病毒DNA/RNA纯度高,质量稳定可靠,可适用于各种常规操作。
该产品可以满足绝大多数的病毒RNA/DNA的同时提取要求,如病毒RNA:HCV(丙肝病毒),HIV(艾滋病毒),和HTLV(人类嗜T淋巴细胞病毒);病毒DNA:HBV(乙肝病毒)和CMV(巨细胞病毒)等等。纯化后的病毒核酸无杂质和PCR抑制剂,可直接适用于PCR/RT-PCR分析。
组分 | 规格 |
裂解液VLB | 20mL |
Poly Carrier - | 200μL |
去蛋白液PE | 16mL |
漂洗液RW | 10mL |
RNase-free H2O | 10mL |
RNase-free吸附柱RA和收集管 | 50套 |
保存:室温,有效期1年。其中Poly Carrier常温运输,4℃可存放一个月,长期保存置于-20℃保存。
- 第一次使用前请先在漂洗液RW瓶、去蛋白液PE瓶按照瓶子标签加入指定量无水乙醇!
- 所有的离心步骤均在室温完成,使用转速可以达到13000rpm的传统台式离心机。
- 开始实验前将需要的水浴先预热到特定温度备用。
- 裂解液VLB和去蛋白液PE中含有刺激性化合物,操作时戴乳胶手套,避免沾染皮肤、眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时,要用大量清水或者生理盐水冲洗。
- Poly Carrier使用方法:如果起始处理量很少,我们推荐使用Poly Carrier,如果预期有较大量核酸产量,用户可以根据需要选择是否加入Poly Carrier。使用时在每个样品提取所需裂解液VLB中加入4μL Poly Carrier储存溶液,将裂解液VLB与Poly Carrier溶液充分颠倒混匀即可(裂解液VLB容易起泡沫,请勿使用涡旋振荡混匀)。也可根据样品数量,在总共需要的裂解液VLB中加入总共需要的Poly Carrier混匀备用。混合液在室温24小时内稳定。
- 200μL血清等体液(需回复到室温,不足可用0.9% NaCl或者PBS补足)转入上述1.5mL离心管,加入400μL裂解液VLB,立刻涡旋振荡充分混匀。
- 如果处理样品量小或者病毒预期浓度较低,建议在400μL裂解液VLB中加入4μL Poly Carrier储存溶液。
- 室温(15~25℃)放置10分钟,每隔5分钟,振荡混匀一次。
- 加入450μL无水乙醇,立刻涡旋振荡充分混匀。
- 如果周围环境高于25℃,乙醇需要冰上预冷后再加入。
- 将上述混合物加入一个吸附柱RA中,(吸附柱放入收集管中)13000rpm离心30~60秒,倒掉收集管中的废液。
- 如果总体积超过750μL,可分两次将溶液加入同一个吸附柱RA中。
- 加500μL去蛋白液PE(请先检查是否已加入无水乙醇!),12000rpm离心30秒,弃废液。
- 加入500μL漂洗液RW(请先检查是否已加入无水乙醇!),12000rpm离心30秒,弃废液,加入500μL漂洗液RW,重复一遍。
- 将吸附柱RA放回空收集管中,13000rpm离心2分钟,尽量除去漂洗液,以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
- 取出吸附柱RA,放入一个RNase free的离心管中,在吸附膜的中间部位加30~50μL RNase free H20(事先在65~70℃水浴中加热效果更好),室温放置1分钟,12000rpm离心1分钟。如果想得到较多量的DNA/RNA,可将得到的溶液重新加入离心吸附柱中,12000rpm离心1分钟。
- 洗脱体积越大,洗脱效率越高。如果需要DNA/RNA浓度较高,可以适当减少洗脱体积,但是最小体积不应少于20μL,体积过小降低洗脱效率,减少DNA/RNA产量。
- 病毒DNA可以存放在2~8℃,如果要长时间存放,可以放置在-20℃。病毒RNA建议最好立刻使用,否则立刻短期放置在-70℃备用。
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